在PCR过程中，可能会出现非特异性DNA的合成或引物二聚体的形成，导致PCR反应的灵敏度和特异性不理想。此外，一般DNA聚合酶对于复杂的临床样本耐受性差，需要对核酸进行纯化后进行扩增。基于目前这些问题，Medix Biochemica推出一种新型的Taq DNA聚合酶突变体，在室温下稳定，并且对于复杂的临床样本具有超强的耐受能力。

为了获得一种能在PCR反应中具有更高特异性和灵敏度的热启动Taq DNA聚合酶，我们筛选了一个突变体，对DNA聚合酶进行结构鉴定，并对其突变进一步设计，使其仅在最佳PCR循环温度下具有活性 (图1)。

图1. 突变位于热启动Taq DNA聚合酶 α螺旋结构，

使酶在室温下失活

为了进一步改进聚合酶的热启动活性，设计一段用于结合酶活性位点的适配体，以热可逆的方式激活/阻断酶活性 (图2)。低温下当适配体与酶紧密结合时阻断酶活性，当温度高于55°C时，适配体脱落，从而释放酶活性。

图2. 适配体修饰热启动Taq DNA聚合酶

在PCR体系设置过程中，通常要求冰上或低温环境下操作。对于新型的热启动Taq DNA聚合酶，可以允许其在常温条件下操作，简化了PCR试剂配置的流程。

将新型的热启动Taq DNA聚合酶和野生型Taq DNA聚合酶进行对比。DNA模板浓度由1-0.001 ng/μL梯度稀释后，分别进行PCR扩增，并且两种酶同时于21°C条件下孵育6h后再次进行PCR扩增。新型的热启动Taq DNA聚合酶特异性表现良好，并且在21°C条件下孵育后，酶活性保持不变 (图3)。

图3. 新型热启动Taq DNA聚合酶和

野生型Taq DNA聚合酶的扩增对比

经特别设计的新型热启动Taq DNA聚合酶不需要特别的激活步骤，可快速启动PCR扩增，使PCR整体反应时间减少。用于多重病原体扩增，设置不同的DNA模板浓度10000-10拷贝/反应 (内参基因浓度5000拷贝/反应)，实验证明新型热启动Taq DNA聚合酶在相同扩增条件下可以更快得到可靠的多重检测结果 (图4)。