2022-04-08

爽、快到飞起的感受,你从未拥有——零步法RT-PCR检测

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爽、快到飞起的感受,你从未拥有

——零步法RT-PCR检测

对于RNA样本检测,常规传统的一步法检测,需要依赖于单独的逆转录酶先进行反转录、完成cDNA合成后,再启动DNA聚合酶活性、进入循环扩增环节,整个反应过程耗时相对较长,需要双酶协同工作,对于体系优化具有一定挑战。
Medix Biochemica重磅推出双功能重组酶预混试剂——Volcano3G®,具有高达95℃的热稳定性,兼具逆转录酶和DNA聚合酶活性,实现零步RT-PCR、粗样本直扩检测。

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Volcano 3G聚合酶.jpg

双管齐下

兼具逆转录酶和DNA聚合酶活性


Volcano3G®预混试剂中,采用的工程化重组Taq DNA聚合酶,兼具逆转录酶和DNA聚合酶活性,可同时实现反转录cDNA的合成和DNA扩增,真正实现零步法RT-PCR检测。

Volcano3G®中使用的兼具逆转录酶活性的双功能 Taq DNA聚合酶,适用于RNA和/或DNA模板的检测(蓝色实线          、黄色实线          ),而普通Taq DNA聚合酶,仅适用于针对DNA模板的扩增检测(黄色虚线.......),不能进行RNA反转录(蓝色虚线.......)。

引用文献:Johannes W. P. Kuiper, Timo Baade, et al. Detection of SARS-CoV-2 from raw patient samples by coupled high temperature reverse transcription and amplification. PLoS One. 2020 Nov 2;15(11):e0241740.

Volcano3G®快速零步法 RT-PCR,相较于传统一步 RT-PCR,节省了15+5 min单独逆转录和预变性过程,极大程度缩短了检测时间。

稳健如飞

零步法RT-PCR检测,缩短反应时间,支持粗样本直扩


Volcano3G®基于适配体修饰热启动酶配方,支持在高温条件下即时启动循环,无需单独的样本提取步骤,实现粗样本直接扩增,并且在双功能工程化酶的作用下,极大程度缩短检测时间。

传统一步法.jpg

快速零步法.jpg

烈火真金

高达95℃真正耐高温的双功能酶


Volcano3G®热稳定性高达95℃。在45~95℃温度范围依然保持高效的RNA逆转录和DNA扩增效率。较高的逆转录温度有助于减少靶基因中形成的RNA二级结构,提高引物特异性,从而提高扩增效率。

双功能Volcano 3G聚合酶.jpg

实验组:Volcano3G®、供应商B和供应商C试剂,于45~95℃加热15min后,用于SCV2为样本的RT-qPCR检测,得到Cq(实验组)。

对照组:以SCV2为样本,分别使用Volcano3G®、供应商B和供应商C试剂进行扩增检测,得到Cq(对照组)。

根据Cq(对照组)- Cq(实验组)得到的ΔCq值,可以看出供应商B和供应商C(绿色、橙色)经过高温处理后,增加的ΔCq表明在恒定模板量前提下发生延迟或没有扩增,而Volcano3G®(黑色)经过高温后依然保持高效酶活性,具有更优的热稳定性。

 

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